Методика выявления подтипов ФГМ

Методика выявления подтипов ФГМ

На наш взгляд, наиболее удобна для восприятия номенклатура изоферментов, фенотипов, генотипов и аллелей генного локуса ФГМ1, предложенная Р. Kuhnl и сотр (1977) Она представлена вторым столбцом табл. Изоэлектрическое фокусирование в геле агарозы по W. Martin (1982) Электролиты: анодный 1,7 М Н3РО4, катодный 1 М NaOH. Гель: толщина 0,5 мм, размер 12,5×26 см. 375 мг изогель-агарозы растворяют в 20,6 мл дистиллированной воды, кипятят при помешивании до полного ее расплавления. Гель: толщина 0,5 мм, размер 12,5×26 см. 375 мг изогель-агарозы растворяют в 20,6 мл дистиллированной воды, кипятят при помешивании до полного ее расплавления. После охлаждения раствора агарозы до 60 °С в него добавляют амфолиты фирмы LKB (Швеция): LKB в пределах pH 4—6 0,62 мл, LKB в пределах pH 6—8 0,62 мл, LKB в пределах pH 3,5—10 0,14 мл. Концентрация амфолитов составляет 2,5%. Прививка образцов: очищенный от стромы эритроцитов гемолизат на кусочкахфильтровальной бумаги фирмы DESAGA № 121231, размером 4X7 мм, вносят в сделанный специальным перфоратором ряд углублений, расположенных в 1,2 см от полосок фильтровальной бумаги, мостиком соединяющей анодный электролит с гелем агарозы.

Проведение изоэлектрического фокусирования: никакого предварительного «холостого» изоэлектрофокусирования не требуется. Устанавливают максимальное напряжение (2000 В) и силу тока; Р устанавливают на самую низкую величину и потом постепенно поднимают настолько, чтобы начальное напряжение составило 500 В. Через 15 мин кусочки фильтровальной бумаги, пропитанные гемолизатом, удаляют и изоэлектрическое фокусирование проводят в течение 35 мин. Общая продолжительность изоэлектрофокусического разделения 50 мин.

1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд (Еще не оценили)
Загрузка ... Загрузка ...

Оставить комментарий

Почта (не публикуется) Обязательные поля помечены *

Вы можете использовать эти HTML теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Подтвердите, что Вы не бот — выберите самый большой кружок: